抽氣型厭氧罐通過真空抽吸與氣體置換技術(shù)，為厭氧微生物培養(yǎng)提供穩(wěn)定無氧環(huán)境，廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)研究、臨床診斷及工業(yè)發(fā)酵領(lǐng)域。其操作需嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化流程，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。以下從設(shè)備準(zhǔn)備、抽氣換氣、培養(yǎng)操作到結(jié)果分析，解析抽氣型厭氧罐的核心使用方法。
 

　　一、設(shè)備預(yù)檢與培養(yǎng)基準(zhǔn)備

　　1.罐體檢查：確認(rèn)罐體密封圈無破損，夾具滑動(dòng)順暢，快速插拔接口無污漬。使用前用75%乙醇擦拭罐體表面，禁用酒精直接接觸罐蓋凹槽。

　　2.培養(yǎng)基配置：選擇中性紅瓊脂或玉米醪瓊脂培養(yǎng)基，融化后冷卻至45℃±2℃，倒入無菌培養(yǎng)皿中，厚度約3mm。若使用一次性平皿，需選擇透氣性良好的材質(zhì)。

　　3.指示劑與催化劑準(zhǔn)備：將美藍(lán)指示劑管、鈀粒催化劑管（140℃活化2小時(shí)）及吸濕劑包（變色硅膠）放入罐內(nèi)，用于監(jiān)測氧濃度與濕度。

　　二、抽氣換氣操作

　　1.裝罐密封：將接種有厭氧菌的平板正置放入罐內(nèi)支架，避免倒置導(dǎo)致平板脫落。快速旋緊罐蓋夾具，確保定位桿與凹槽對齊，旋緊至阻力增大后微調(diào)即可。

　　2.真空抽吸：連接真空泵與罐蓋抽氣接口，啟動(dòng)真空泵，抽至負(fù)壓0.09-0.093MPa（680-700mmHg），用止血鉗夾緊橡膠管暫停抽氣。

　　3.氣體置換：

　　①氮?dú)鉀_洗：打開氮?dú)怃撈块y門，緩慢充氣至真空表歸零，關(guān)閉閥門并夾緊橡膠管，重復(fù)抽氣-充氣操作2-3次。

　　②混合氣體充入：按N2:CO2:H2=80:10:10（V/V）比例分步充氣。先充N2至0.021MPa，再充CO2至0.011MPa，最后用醫(yī)用氧氣袋灌裝H2充至零壓。H?需經(jīng)鈀粒催化與殘余O2反應(yīng)生成水，確保無氧環(huán)境。

　　三、培養(yǎng)與監(jiān)測

　　1.恒溫培養(yǎng)：將厭氧罐置于37℃恒溫箱中，培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)菌種特性而定（如丙酮丁醇梭菌需5-7天）。

　　2.氧濃度監(jiān)測：每24小時(shí)觀察美藍(lán)指示劑顏色變化，若指示劑保持無色，則證明無氧環(huán)境穩(wěn)定。

　　四、結(jié)果分析與設(shè)備維護(hù)

　　1.菌落觀察：培養(yǎng)結(jié)束后，取出平板觀察菌落形態(tài)。丙酮丁醇梭菌在中性紅平板上呈黃色菌落，需挑取典型菌落進(jìn)行鏡檢。

　　2.罐體清潔：用中性清潔劑擦拭罐體，避免劃傷密封圈。定期涂抹無酸凡士林或硅酮油脂保養(yǎng)密封圈，延長使用壽命。

　　抽氣型厭氧罐通過精準(zhǔn)的抽氣換氣操作，為厭氧微生物研究提供了可靠工具。嚴(yán)格遵循操作規(guī)程，可顯著提升實(shí)驗(yàn)成功率，助力微生物學(xué)與生物技術(shù)領(lǐng)域的發(fā)展。